CRISPR/Cas9基因编辑技术研讨会2019上海班

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CRISPR/Cas9基因编辑技术研讨会2019上海活动家2019.9.24并入侵外来DNA。 CRISPR的II型已广泛用于基因工程,它包含Cas9,crRNA和tracrRNA,它们均含有能够识别20 bp的靶向互补序列。 Cas9,crRNA和tracrRNA形成复合物,识别并结合crRNA的互补序列,然后解开DNA双链。 Cas9中的HNH活性位点切割crRNA的互补DNA链,而RuvC活性位点切割非互补链。这会导致DNA的双链断裂(DSB),进而使基因敲除和插入成为可能。

目前,CRISPR/Cas9系统已被广泛用于哺乳动物细胞,细菌,斑马鱼,小鼠,猪和猴子的基因编辑。

该课程将详细解释CRISPR/Cas9基因编辑工具的原理,操作程序,理论和实践,并让您详细了解如何使用遗传/修饰动物构建转基因动物。研讨会将为相关研究人员和爱好者提供良好的培训资源。

会议时间:2019年10月26-28日(3天)25日报名

聚会地点:上海

课程内容:

1。基因编辑技术简介

基因编辑技术原理

基因编辑技术应用

介绍三种基因编辑技术(ZFN,TALEN和CRISPR/Cas9)

介绍其他类型的CRISPR核酸酶(人工修饰后的Cpf1,SaCas9,Cas9)

2。常用的运营商和网站介绍

CRISPR/Cas9常见载体介绍

基因序列分析(请带上自己的笔记本电脑或手机进行无线上网,在线设计练习)

设计gRNA网站(在线设计演练)

构建gRNA表达载体(设计练习)

PCR引物设计(设计演练)

3。脱靶检测及后续实验方法

检测脱靶的方法

提高CRISPR/Cas9特异性的方法

CRIS/Cas9导入细胞的方法

4.Px330质粒系统说明

px330质粒系统简介。

SgRNA寡核苷酸模板退火方案。

将gRNA退火至线性化CRISPR/Cas9载体的详细协议。

将连接产物转化到大肠杆菌(DH5α)中。

将转化产物铺板并培养。

插入寡核苷酸后基因编辑质粒ps330质粒系统的鉴定

构建同时敲除两个基因的质粒系统

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CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期选择压力中形成的一种适应性免疫防御,可用来有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPR的Type II已经被广泛用于基因工程,它包含Cas9,crRNA和tracrRNA,其中crRNA含有能够识别20bp的靶向互补序列。Cas9,crRNA和tracrRNA组成复合体,识别并结合crRNA互补的序列,然后解开DNA双链,Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链,RuvC活性位点剪切非互补链,最终导致DNA的双链断裂(DSB),进而实现基因的敲除和插入。

目前,CRISPR/Cas9系统已经广泛用于对哺乳动物细胞,细菌,斑马鱼,小鼠,猪,猴的基因编辑。

本学习班将详细讲解CRISPR/Cas9基因编辑工具原理,操作流程,理论结合实践,将让大家详细了解到具体如何利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰动物等。学习班将为相关科研工作人员和兴趣爱好者提供了很好的培训资源。

会议时间:2019年10月26-28日(3天) 25日报到

会议地点:上海

课程内容:

1.基因编辑技术介绍

基因编辑技术原理

基因编辑技术应用

三种基因编辑技术(ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9)介绍

其他类型的CRISPR核酸酶介绍(Cpf1, SaCas9,人工改造后的Cas9)

2.常用载体和网站介绍

CRISPR/Cas9常用载体介绍

基因序列分析(请自带可无线上网之笔记本电脑或手机,在线设计演练)

设计gRNA的网站(在线设计演练)

构建gRNA表达载体(设计演练)

PCR引物设计(设计演练)

3.脱靶检测及后续实验方法

检测脱靶的方法

提高CRISPR/Cas9特异性的方法

CRISPR/Cas9导入细胞的方法

4.Px330质粒系统讲解

px330质粒系统介绍。

sgRNA oligos模板退火方案。

退火gRNA与线性化CRISPR/Cas9载体连接详细方案。

连接产物转化到大肠杆菌(DH5α)。

转化产物涂板培养。

鉴定插入oligo后的基因编辑质粒ps330质粒体系

构建同时敲除两个基因的质粒体系

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